[Dyne 30th 기초실험방] Cell Transfection
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작성자 다인바이오 작성일15-04-28 17:07 조회49,676회 댓글0건첨부파일
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본문
Cell Transfection
1. 목적
관심의 대상이 되는 외부 gene을 삽입하여 외부 DNA가 세포 내에서 발현되도록 하는 것
2. Transfection Type
1) Plasmid DNA transfection
2) siRNA transfection
3) in vivo transfection
3. Transfection Methods
1) Chemical Methods
- Calcium-Phosphate
원리: (+)를 띠는 calcium phosphate가 (-)를 띠는 DNA와 만나 복합체 형성. 복합체가 세포의 표면에 흡수되고 Endocytosis를 통해 세포 내로 진입.
특징: 20~50%의 Transfection 효율. Primary cell에서는 잘 안됨. 독성이 낮음. 재현성이 떨어짐. In vitro 가능
원리: (+)를 띠는 cationic polymer를 (-)를 띠는 DNA와 만나 복합체 형성. (+)를 띠는 DNA가 (-)를 띠는 세포막에 융합되고 Endocytosis를 통해 세포 내로 진입.
특징: 저렴하다. 실험이 용이하다. 넓은 범위의 세포에서 적용가능. 높은 농도의 Dextran을 사용할 경우독성이 있음. 세포타입에 따라 transfection 효율이 다름. In vitro, in vivo 그리고 ex vivo 가능.
특징: Calcium-Phosphate법보다 transfection 효율이 높다. In vitro, in vivo 그리고 ex vivo 가능.
2) Physical Method
- Electroporation
특징: Chemical법으로 Transfection이 잘 안되는 경우 사용. Tranfection 효율이 높음. 독성이 높음. In vitro, in vivo 그리고 ex vivo 가능.
3) Virus-mediated Methods
Retroviruses
- Murine leukemia virus (MuLV)
- Human immunodeficiency virus (HIV)
- Human T-cell lymphotropic virus (HTLV)
DNA viruses
- Adenovirus
- Adeno-associated virus (AAV)
- Herpes simplex virus (HSV)
4. 추천제품
Roche사의 X-tremeGENE DNA Transfection Reagent 는 타사의 비해 상당히 낮은 세포독성과 높은 transfection 효율을 나타냅니다.
1) 특징
- 고효율의 제품으로 타사 제품에 비해 사용량이 적어 ml당 테스트수가 많고, 세포독성은 더 낮습니다.
- 세포독성은 낮고 Transfection 효율이 높습니다.
5. References
http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/10-0826_transfection_tutorial_interactive.pdf