실험자료실

[Dyne 29th 기초실험방] Cell counting

페이지 정보

작성자 다인바이오 작성일15-03-16 11:20 조회29,904회 댓글0건

첨부파일

본문

Cell counting 

 

 

1. Hemocytometer 준비

1) 70% 에탄올을 이용하여 Hemocytometer를 깨끗이 닦는다.

2) Hemocytometer kit에 제공되는 Coverslip을 촉촉하게 적신 후 Hemocytometer 위에 조심스럽게 올린다. (Coverslip을 닦을 때 깨지지 않도록 유의)

 

2. Cell suspension 준비

1) Cell single cell로 잘 풀어지도록 한다.

2) Cell suspension serological pipette를 이용하여 1 ml 가량을 1.5 ml micro tube에 옮겨준다.

3) 100 μL 피펫을 이용하여 1.5 ml micro tube안에 있는 cell을 다시 한번 잘 풀어준 뒤 20 uL cell suspension을 새로운 1.5 ml micro tube에 옮겨준다.

4) 20 μL Trypan blue 20 μL cell suspension과 피펫을 이용하여 충분히 섞어준다.

 

3. Counting

1) 10 20 μL의 세포현탁액을 피펫을 이용하여 Hemocytometer의 좁은 홈으로 주입한다.

 

2) Microscope (배율 X10)로 하여 초점을 맞추고 아래 순서에 따라 4 square의 세포 수를 센다. (세포 수를 세는 방법은 실험에 따라 차이가 있을 수 있음.)

 

03m_3whemocytometer-squares-to-count.png

http://www.hemocytometer.org/

 

3) 각 정사각형 안의 세포 수를 셀 때 실선으로 표시된 부분에 걸친 세포는 세지만, 점선으로 표시된 부분에 걸친 세포는 세지 않아야 한다. (이때, Trypan blue로 염색된 세포는 죽은 세포이므로 세지 말아야 함.)

 

4. Calculating

Cell density (ml) = Total cell count / # of square x Trypan blue dilution factor * 104

) 200 (Total cell count) / 4 (# of square) x 2 (Trypan blue dilution factor) x 104 = 1 x 106 cells/ml

 

Total cell number = Cell density * Cell suspension volume (ml)

) 1 x 106 x 20 (ml) = 2 x 107 Total cells

 

5. 참고문헌

http://www.abcam.com/

http://www.hemocytometer.org/






게시물 검색