실험자료실

[Dyne 7th 기초 실험방] SDS PAGE-2

페이지 정보

작성자 다인바이오 작성일12-10-30 08:41 조회8,833회 댓글0건

첨부파일

본문

 
 

 
SDS-PAGE(2) - Troubleshooting
()다인바이오 연구소


1. Gel 조제가 어렵다.

  전기영동이 잘되고, 깨끗한 데이터를 얻을 있는 가장 좋은 요령은 깨끗한 gel 제작하는 것이며, 얼룩이 없는 gel 제작하려면 다음과 같은 사항에 주의해야 한다.

  첫째로, 깨끗한 유리 plate comb 사용한다. 더러워져 있으면 gel 되기가 어렵다.

  Gel 용액은 조심스럽게 충분히 섞어야 한다. 균일한 용액이 아니면 균일한 gel 만들 없고, 장시간 또는 지나치게 섞어주게 되면 공기 중의 산소가 용해되어(산소는 gel 저해) gel화가 어렵다. 방법에 따라서는 용액을 탈기시키는 경우도 있다(Isoelectric 전기영동 gel 제외). 또한 acrylamide bisacrylamide의 농도와 비율이 적합하지 않을 경우에는 gel이 마치 점액질 같이 강도가 낮아진다.

  Gel이 전혀 굳지 않는 현상은 APS가 만들어진지 오래된 경우 나타날 수 있는 전형적인 경우로, APS를 새로 만들어 사용한다.

  4에서 꺼낸 시약을 즉시 사용하거나 주입하게 되면 온도에 의해 얼룩이 생길 있다. 이는 gel화가 온도에 의해 영향을 받기 때문이다(따뜻한 쪽이 gel화가 어렵다). 냉난방이 잘되는 장소는 피하는 것이 좋고, 일반적으로 gel 농도는 낮은 편이 gel화가 어렵고 높을수록 굳어지기 쉽다. 따라서 3~7% 정도의 저농도 gel 제작하는 경우에는 사항에 주의하면서 (NH4)2SO4 TEMED의 양을 10% 정도 늘려도 좋다. Stacking gel comb 사이에 gel 만들어지지 않는 경우, 방법을 사용할 수 있다. 반대로 고농도 gel 제작하면 유리 plate에서 기포가 들어가는 경우가 있는데, 반대로 (NH4)2SO4TEMED 양을 10% 정도 줄이도록 한다.

 

2. Band가 샤프하지 않거나 모양이 이상하다.

  대부분 buffer 시료에 문제가 있으므로 buffer 시약의 등급이나 농도를 다시 한번 확인한다.

  Laemmli법에서 전기영동용 buffer pH 별도로 조정하지 않아도 된다. 오히려 이온계열에 이상이 생겨 전기영동 결과에 영향을 미치게 된다. 원래 농축작용을 하지 않는 전기영동방법에서는 밴드가 샤프하게 되기 어려운 경우도 있으므로 문헌 등을 참조한다.

 






게시물 검색