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[Dyne 30th 기초실험방] Cell Transfection

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작성자 다인바이오 작성일15-04-28 17:07 조회30,064회 댓글0건

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Cell Transfection 



1. 목적

관심의 대상이 되는 외부 gene을 삽입하여 외부 DNA가 세포 내에서 발현되도록 하는 것

 

2. Transfection Type

1) Plasmid DNA transfection

2) siRNA transfection

3) in vivo transfection

 

3. Transfection Methods

1) Chemical Methods

 - Calcium-Phosphate

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원리: (+)를 띠는 calcium phosphate (-)를 띠는 DNA와 만나 복합체 형성. 복합체가 세포의 표면에 흡수되고 Endocytosis를 통해 세포 내로 진입.

특징: 20~50% Transfection 효율. Primary cell에서는 잘 안됨. 독성이 낮음. 재현성이 떨어짐. In vitro 가능

 

 

 - DEAE-Dextran
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원리: (+)를 띠는 cationic polymer(-)를 띠는 DNA와 만나 복합체 형성. (+)를 띠는 DNA (-)를 띠는 세포막에 융합되고 Endocytosis를 통해 세포 내로 진입.

특징: 저렴하다. 실험이 용이하다. 넓은 범위의 세포에서 적용가능. 높은 농도의 Dextran을 사용할 경우독성이 있음. 세포타입에 따라 transfection 효율이 다름. In vitro, in vivo 그리고 ex vivo 가능.

 

 

 - Cationic Lipids
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원리: 인공적으로 제작된 (+)를 띠는 liposome (-)를 띠는 DNA와 만나 복합체를 형성한다. 이 복합체를 포함한 용액에서 세포를 배양하면 복합체내의 DNA가 세포에 이입된다.

 

특징: Calcium-Phosphate법보다 transfection 효율이 높다. In vitro, in vivo 그리고 ex vivo 가능.

 

2) Physical Method

 - Electroporation

특징: Chemical법으로 Transfection이 잘 안되는 경우 사용. Tranfection 효율이 높음. 독성이 높음. In vitro, in vivo 그리고 ex vivo 가능.

 

3) Virus-mediated Methods

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Retroviruses

 - Murine leukemia virus (MuLV)

 - Human immunodeficiency virus (HIV)

 - Human T-cell lymphotropic virus (HTLV)

 

DNA viruses

- Adenovirus

- Adeno-associated virus (AAV)

- Herpes simplex virus (HSV)

 

4. 추천제품

Roche사의 X-tremeGENE DNA Transfection Reagent 는 타사의 비해 상당히 낮은 세포독성과 높은 transfection 효율을 나타냅니다.

 1) 특징

  - 고효율의 제품으로 타사 제품에 비해 사용량이 적어 ml당 테스트수가 많고, 세포독성은 더 낮습니다.

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 - 세포독성은 낮고 Transfection 효율이 높습니다.

 

5. References

http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/10-0826_transfection_tutorial_interactive.pdf

http://www.expertreviews.org/

 






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