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[Dyne 14th 기초 실험방] 배양계-배지의선택

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작성자 다인바이오 작성일13-09-26 19:05 조회7,497회 댓글0건

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배양계-배지의선택 

 

 

1. 배지(Culture medium)

미생물이나 동식물의 조직을 배양하기 위하여 배양체가 필요로 하는 영양물질을 주성분으로 하고, 특수한 목적을 위한 물질을 넣어 혼합한 것으로 배양기·배양액이라고도 한다.

 

2. 배양의 목적

배양계를 이용한 실험의 목적은 기본적으로 증식과 분화의 조절이라 할 수 있다. 예를 들면 배양세포를 생리활성 물질의 기능해석에 이용하는 경우도 목적 형질은 대부분 증식과 분화이다. 또한 생리활성 물질의 근원으로써 세포를 대량배양하는 경우에도 증식이라는 성질과 그 생리활성 물질을 합성하는 일종의 분화성질이 중요하다. 그러나, 종래의 배지는 증식을 지표로 개발되어 왔으므로, 지금까지 배지가 증식 이외의 형질(배양계에서의 분화, 장기생존, 분화형질 유지 등)을 유도할 수 있는지 고려해 보아야 한다.

 

3. 세포의 배양

일반적으로 배양용기 안에는 세포와 배지만이 존재하는 것으로 생각할 수 있으나, 그림 1에서 보듯이세포 생성물, 세포간 및 세포와 배양용기 표면간의 상호작용 그리고 세포 자체에서 분비되는 다양한 인자가 배지조성을 변화시킨다.
09m_4w그림1.jpg

그림 1. 배양계의 전체상


4. 배지교환

배지교환이란 영양소가 고갈된 배지를 영양이 풍부한 새로운 배지로 교환하여 세포의 증식을 촉진하는 것을 의미하나, 실제로는 세포에서 분비된 증식 저해물질과 노폐물을 제거한다는 중요성도 있다. 이러한 관점에서 볼 때 배지의 교환 빈도도 배지선택만큼 중요한 고려 사항이다.

 

5. 배지의 역할

배지의 역할로는 1) pH, 삼투압 등의 기초적 생리상태를 유지하는 것, 2) 기초영양을 보급하는 것, 3) 적극적으로 세포의 표현형을 지배하여 실험목적에 부합하는 세포의 반응을 얻는 것 등을 생각할 수 있다.

 

6. 배지의 선택

현실적으로 자신의 목적에 맞는 배지에 대하여 근본적인 검토 없이 문헌에 이용한 배지를 그대로 사용하는 경우가 많다. 그러나 동일한 세포를 배양하는 경우에도 목적에 따라 다른 배지를 고안해야 하는 경우도 있다. 증식속도를 추구하거나, 고포화 세포밀도에서의 안정성, 클론증식, 분화유도를 목적으로 하는 등의 목적에 따라 다른 배지를 선택할 필요가 있다.

Cell line과 대부분의 사람, mouse, chicken fibroblast 초대배양은 기본적으로 Eagles MEM에 소혈청을 첨가한 배지로 가능하다(1). 그러나 특별한 분화형질을 가진 세포와 정상 상피세포에 있어서는 각각의 문헌을 참조하여 첨가물을 선택, 조합하여 상세한 농도를 검토하는 것이 좋다.


09m_4w표1.jpg

1. 각 세포의 배양 보고예

C: cell line, PL: 초대배양, S: 혈청첨가, F: 무혈청, P: define되지 않은 단백질을 함유한 무혈청

MEM: Earle’s minimal medium essential, DME: Dulbecco’s modified minnimal essential medium

공란: 보고예가 불명확한 것으로 이 기초배지 중에서 세포가 증식하지 않는 것은 표시하지 않았다.


* References

- Takara-실험강좌(LS&B)

- Freshney, R. I.: Culture of aminal cells, Alan Liss, 67-78, 1983.








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