제품설명

Dyne Site-directed Mutagenesis kit은 주형으로 사용한 이중가닥 plasmid에 site-specific mutation이 가능하고 단일가닥 DNA에 표적 DNA를 주입하는 subcloning 시간을 단축한다. 특정 vector 혹은 제한효소 절단부위가 불필요하다. 그러므로, 쉽고 편리하게 mutation을 수행할 수 있다.

제품구성

•Dyne MIX •Dyne 2X MIX Buffer

•Dyne Pfu-Forte •10X Reaction Buffer

•Control Primers-Dynecm (10 pmol/µl)

•Control Plasmid-pDyneΔcm (4.7 kb, 5 ng/µl)

•dNTP Mixture (2 mM each)

•Sterile water

사용상의 주의

•Mutagenic primer mismatch는 annealing 중 melting temperature에 영향을 준다.

그러므로, mutagenic primer의 sequence는 다른 nonmutagenic promer와의 Tm을 맞추도록 디자인한다.

PCR 중 표적 DNA을 더 정확하고 효과적으로 증폭할 수 있다. 이는 mutagenic primer에 GC 비율을 증가함으로써 가능하다. PCR 시 annealing temperature는 Tm값보다 5~10℃ 낮게하여 수행한다.

•Primer 길이는 18-35 base가 되도록 한다. Primer는 적어도 40%의 GC content를 가져야하며 하나 이상의 C혹은 G base로 끝나야 한다.

•사용 전에 정제된 synthetic primer 사용을 권장한다. 만약 정제되지 않은 primer이면, primer내 aberrant oligonucleotides로 인해 원치 않는 mutation이 증가할 수 있다. Desired site-directed mutagenesis가 감소되는 주요 원인이다.

•primer 5' end의 enzymatic 인산화를 포함하기 위해 제작되었으므로 5' 인산기 oligonucleotides 사용은 불필요하다.

•Dyne Pfu-Forte (Cat.# DYP1180)는 PCR시 Dyne Taq polymerase (Cat. # DYP1010, DYP1012)보다 높은 fidelity로 DNA를 합성한다.

응용분야

•Single or multiple deletions

•Insertion mutation

제품특징

•No subcloning

•High efficiency

•Site-direted mutagenesis in a single day

보관온도 : -20℃